Checklite 250 PlusKit til mikrobielle biomasseanalyser og hygiejnekontrol til 250 bestemmelser

CheckLite 250 Plus er et sæt til mikrobiel biomasseanalyse og hygiejneovervågning baseret på ATP-målemetoden. Det kan detektere mængden af ATP svarende til over 10.000 celler af E. coli/ml.

Den indeholder termostabile ildflue luciferaser. Det bioluminescerende reagens indeholder firefly luciferin og luciferase. Dette luciferaseenzym katalyserer reaktionen, hvor luminescens observeres på grund af ATP og luciferin interaktion. Mængden af bioluminescens produceret i reaktionen er direkte proportional med mængden af ATP i prøven

1 x 250 bestemmelser

Testvarighed: 20-40 minutter inklusive kalibreringskurve

Opbevaring: 2 – 8°C, må IKKE NEDFRYSES

Sættets indhold:

Luciferin-Luciferas-reagens – 5 hætteglas med frysetørret pulver

Rekonstitutionsbuffer – 5 hætteglas (5,5 ml)

ATP-reagens – 5 hætteglas (5,5 ml)

Forberedelse af bioluminescensreagens

Luciferin-Luciferas-reagenset opbevares under vakuum i flasker mærket med grønne etiketter.

Hæld rekonstitutionsbufferen fra det lyserødmærkede hætteglas i det åbnede grønmærkede hætteglas og lad det stå ved stuetemperatur i et par minutter (der kan dannes et svagt sediment i rekonstitutionsbufferen under opbevaring. Dette påvirker ikke testresultaterne).

Rør forsigtigt i hætteglasset, indtil indholdet er helt opløst. Undgå skumdannelse.

Rør ikke ved flaskens kant eller toppen af gummiproppen direkte med dine hænder, da dette nogle gange kan øge reagensets basisværdi.

Et hætteglas Luciferin-Luciferas-reagens kan anvendes til mere end 50 analyser under normale forhold.

Håndtering af prøver

ATP-koncentrationen i levende celler ændrer sig hurtigt. Ekstraher derfor ATP fra cellerne eller frys cellerne umiddelbart efter prøvetagning. Selv under ekstraktion kan det være nødvendigt at hæmme eller ødelægge ATP-nedbrydende enzymer for at forhindre enzymer i at sænke ATP-koncentrationen.

Prøveforbehandling

Faste prøver:

Behandl prøven med en stomacher eller en homogenisator, og brug supernatanten til efterfølgende måling.

Væskeprøver:

Hvis prøveopløsningen er uklar eller farvet eller indeholder hæmmende ioner såsom Cl-, fortyndes prøven efter behov.

Måling

Hæld 100 µl af prøven, behandlet som beskrevet ovenfor, i et reagensglas til måling og tilsæt 100 µl af den ATP-frigivende reagensopløsning i reagensglasset.

Lad reagensglasset stå ved stuetemperatur i 10-60 sekunder for at udtrække ATP fra cellerne. Den tid, der kræves til ekstraktion, varierer afhængigt af typen af mikroorganismer. For eksempel tager det 10-20 sekunder at udtrække ATP fra bakterieceller og 60 sekunder for gærceller.

Umiddelbart efter ekstraktion tilsættes 100 µl af Luciferin-Luciferase-reagensopløsningen og mængden af bioluminescens måles med et luminometer såsom Lumitester C-110 (ID-nr. 1 002 647).

For at oprette en kalibreringskurve skal du måle mængden af bioluminescens af trinvise fortyndinger af ATP-standardopløsningen ved hjælp af metoden beskrevet ovenfor.

Antallet af mikrobielle celler (kolonidannende enheder, CFU) kan bestemmes ud fra sammenhængen mellem mængden af ATP og antallet af CFU, som tidligere blev talt ved hjælp af den konventionelle kolonitællingsmetode.